Gene | Primer name | Primer sequence | Product size (bp) | PCR cycling conditions |
---|---|---|---|---|
Nest I | ||||
 pvdhfr | A1F | 5′ATGGAGGACCTTTCAGATGTATTTGACATT 3′ | 720 | 105 °C for 5 min; (95 °C for 30 s; 50 °C for 30 s; 72 °C for 50 s) × 30 cycles; 72 °C for 10 min |
A1R | 5′GGCGGCCATCTCCATGGTTATTTTATCGTG 3′ | |||
 pvdhps | 2A F | 5′ATTCCAGAGTATAAGCACAGCACATTTGAG3′ | 840 | 104 °C for 5 min; (95 °C for 50 s; 57 °C for 1 min; 72 °C for 1 min) × 35 cycles; 72 °C for 10 min |
2A R | 5′CTAAGGTTGATGTATCCTTGTGAGCACATC 3′ | |||
Nest II | ||||
 pvdhfr | A2F | 5′TTTATGATGGAACAAGACTGGGACGTT 3′ | 701 | 100 °C for 5 min; (95 °C for 45 s; 52 °C for 40 s; 72 °C for 1 min) × 32 cycles; 72 °C for 10 min |
A2R | 5′TCACACGGGTAGGCGCCGTTGATCCTCGTG 3′ | |||
 pvdhps | 2 B F | 5′AATGGCAAGTGATGGGGCGAGCGTGATT 3′ | 610 | 95 °C for 5 min; (94 °C for 40 s; 54 °C for 55 s; 72 °C for 1 min) × 35 cycles; 72 °C for 10 min |
2B R | 5′CAGTCTGCACTCCCCGATGGCCGCGCCAC 3′ |